Kif Iffriżar-Nixxef Kultura Bacterial (Lyophilization)

Il-lajofilizzazzjoni, jew it-tnixxif bil-friża, hija proċedura qasira tal-laboratorju

It-tnixxif bil-friża, imsejjaħ ukoll lyophilization jew cryodesiccation, huwa l-proċess li jitneħħa l-ilma minn prodott wara li jkun iffriżat (u mbagħad imqiegħed taħt vakwu) li jippermetti li s-silġ jinbidel minn solidu għal fwar, mingħajr ma jgħaddi minn fażi likwida. Is-silġ (jew solventi ffriżati oħrajn) jitneħħew minn prodott permezz tal-proċess ta 'sublimazzjoni u l-molekuli tal-ilma mwaħħlin jitneħħew permezz tal-proċess tad-desorbiment.

Il-Bażiċi tal-Liofilizzazzjoni

Wieħed mill-aħjar modi biex taħżen kultura batterjoloġika, fungali, ħmira jew mikroorganiżmu ieħor għal perjodi twal ta 'żmien huwa li tuża l-proċess ta' tnixxif bil-friża. Din il-proċedura qasira tal-laboratorju tista 'ssir bi kwalunkwe dryer freezer disponibbli kummerċjalment li jippreserva l-kollezzjoni tal-kultura tiegħek. Minħabba li l-lajofilizzazzjoni hija l-aktar forma kumplessa u għali ta 'tnixxif, il-proċess huwa ġeneralment ristrett għal materjali delikati u sensittivi għas-sħana ta' valur għoli. Is-sustanzi li ma jiġux iddanneġġjati mill-iffriżar normalment jistgħu jiġu lajofilizzati sabiex il-ħażna refriġerata mhix meħtieġa.

Dan il-proċess jista 'jieħu mill-inqas tliet sigħat, u sakemm ikun hemm 24 siegħa, mingħajr iż-żmien tat-tkabbir kulturali.

Il-Proċess ta 'Lijofilizzazzjoni pass pass

1. L-ewwel, ikabbru kultura ta 'matul il-lejl, jew lawn, tal-mikroorganiżmu fuq LB jew pjan ta' agar nutrittiv ieħor xieraq.

2. Sussegwentement, ipprepara kunjetti sterili tal-kappa b'apparat awtomatiku qabel iż-żmien, bil-brieret (tappijiet tal-gomma) mqiegħda bla bzonn fuq nett. Poġġi tikketti tal-karta stampati bl-identifikazzjoni tal-kultura ġewwa t-tubi qabel l-awtoklamazzjoni. Alternattivament, tuża tubi b'kaps mfassla għall-isterilità .

1. Żid 4 mL bafer ta 'lyophilisation mal-pjanċa. Jekk meħtieġ, iċ-ċelloli jistgħu jiġu sospiżi bl-użu ta 'virga tal-ħġieġ sterili.

2. Trasferixxi malajr is-sospensjoni tal-kultura għall-kunjetti sterilizzati. Żid madwar 1.5 ml kull kunjett. Siġill bl-għatu tal-gomma.

3. Iffriża s-sospensjoni tal-kultura ġewwa l-kunjetti billi tpoġġi l-kunjetti fi friżer ta '-20 grad Celcius.

1. Ladarba l-kulturi jkunu ffriżati, ipprepara l-iffriżar billi ddawwarha u tħalli ħin biex it-temperatura xierqa u l-kundizzjonijiet tal-vakwu jistabbilixxu ruħhom. Agħmel dan skond l-istruzzjonijiet tal-manifattur għall-marka partikolari ta 'freeze-dryer li qed tuża.

2. B'attenzjoni, u b'mod asettiku, poġġi l-limiti tal-kunjetti b'mod ħafif fuq il-kunjetti, sabiex l-umdità tkun tista 'taħrab waqt il-proċess tat-tnixxif tal-friża, u poġġi l-kunjetti ġo kompartiment tal-friża. Applika l-vakwu fil-kamra skond l-istruzzjonijiet tal-manifattur.

3. Ħalli l-ħin tal-kultura għal lajofilizzazzjoni kompleta (nixxef). Dan jista 'jieħu minn ftit sigħat għal lejl skont il-volum ta' kull kampjun u kemm-il kampjun ikollok.

4. Neħħi l-kampjuni mill-kamra ta 'l-iffriżar tal-friża skond l-istruzzjonijiet tal-fabbrikant u ffirmat immedjatament il-kunjetti bil-tappijiet tal-gomma, imbagħad il-parti ta' quddiem tal-korda.

5. Aħżen il-ġbir tal-kultura lyophilised f'temperatura tal-kamra.

Prodotti li għandek bżonn

• Iffriżar-dryer
• Pjanċi ta 'agar nutrittivi jew oħrajn xierqa (u inkubatur biex jikbru l-kultura)
• Vireg tal-ħġieġ
• Buffer ta 'lajofilizzazzjoni
• Kunjetti ta 'crimp-top b'tappijiet tal-gomma (u crimper biex japplikaw il-limiti)
• Friżer

<sub>Referenza:

SP Xjentifiku. Prinċipji Bażiċi tat-Tnixxif bil-Frost. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>