Kinetika ta 'Enżimi ta' Kejl
Bħala daqsxejn ta 'sfond, l- enzimi huma proteini li jaġixxu bħala katalizzaturi biex inaqqsu l-ammont ta' enerġija ta 'attivazzjoni biex isseħħ reazzjoni. L-enerġija ta 'l-attivazzjoni hija l-enerġija li hija meħtieġa biex tikseb ir-reazzjonijiet "bdew" minħabba li ħafna reazzjonijiet ma jseħħux malajr ħafna (jew iseħħu kollha) jekk huma termodinamikament possibbli.
L-enżimi jikkatalizzaw reazzjonijiet speċifiċi f'sit partikolari (magħruf bħala s-sit attiv) fejn ir-reaġenti jorbtu u jirreaġixxu biex jiġġeneraw il-prodotti. Is-sustrati għandhom siti attivi li huma speċifiċi biss għalihom sabiex l-ebda sustanzi oħra ma jorbtu jew ma jirreaġixxu fl-istess sit. Bħal serratura u ċavetta, kull enzima se tikkatalizza reazzjoni speċifika waħda biss (b'xi eċċezzjonijiet).
Attività speċifika tintuża f'metodi ta 'iżolament tal-proteina biex tindika l-persentaġġ ta' purifikazzjoni. Huwa importanti li tkun taf din l-unità meta tixtri l-enzimi biex tindika eżattament kemm għandek l-enżima pura li qed tieħu.
Meta tkejjel il-kinetika ta 'l-enżimi (ir-rata ta' reazzjoni ta 'enżima b'sostrat jew superfiċje), attività speċifika hija definita bħala l-ammont ta' sottostrat li l-enzima tikkonverti (reazzjonijiet katalizzati) għal kull mg ta 'proteina fil-preparazzjoni ta' l-enżima għal kull unità ta 'ħin.
Eżempju ta 'attività speċifika jkun:
- L-attività speċifika tal-enzima iżolata ġiet imkejla f'1000 umola / min / mg ta 'proteina qabel il- purifikazzjoni u 800 umola / min / mg, wara purifikazzjoni.
L-attività speċifika hija miżura importanti tal-purità ta 'l-enżimi. Lottijiet differenti ta 'enżima pura għandhom ikollhom l-istess valuri u saħansitra jnaqqsu s-soluzzjoni ta' l-enzima ħafna drabi jkollhom valuri ta 'attività speċifiċi identiċi minkejja li se jkun hemm valuri differenti ta' attività ta 'l-enżimi. Dan minħabba li fil-kalkolu ta 'attività speċifika, in-numeratur (unitajiet / ml) u d-denominatur (mg / ml) huma affettwati bl-istess mod.
L-attività speċifika hija differenti ħafna mill-attività, iżda l-kalkolu ta 'attività speċifika għadu jiddependi fuq il-valur tal-attività. Dan ifisser li l-valur ta 'attività speċifika ddikjarat se jiddependi wkoll fuq id-definizzjoni tal-unità tal-enzimi.
Lottijiet ta 'enżimi li għandhom valur ta' attività speċifika aktar baxx milli mistenni jista 'jkun fihom molekuli ta' enżimi li ġew mibdula jew imħallta bl-impuritajiet.
Fatturi li jaffettwaw l-Attività ta 'l-Enżimi
Huwa possibbli li enzima waħda jista 'jkollha valuri differenti ta' attività mkejla meta mkejla f'laboratorji differenti (jiġifieri differenzi reali f'attività mkejla, mhux differenzi apparenti kkawżati mill-użu ta 'definizzjonijiet unitarji differenti).
Il-mod li bih titwettaq l-analiżi (il-metodu tal-ittestjar biex tiġi ddeterminata l-purità tal-enżimi) se jinfluwenza l-valuri tal-attività rrappurtati. Per eżempju, l-enżimi huma ġeneralment aktar attivi bejn it-temperaturi ta '37 grad Celsius meta mqabbla ma' 20 grad Celsius, hekk jekk l-analiżi ssir f'21 gradi Celsius, il-valuri se jvarjaw mill-analiżi magħmula f'temperatura ta '32 grad Celsius , l-analiżi ssir f'temperatura ta 'bejn 20-37 grad Celsius).
Għalhekk, id-definizzjoni tal-unità tal-enzima tkun espressa aħjar bħala unità 1 (U) hija l-ammont ta 'enzima li tikkatalizza r-reazzjoni ta' 1 nmol ta 'sottostrat kull minuta taħt kundizzjonijiet standard.