Liema Vetturi Għandhom Jagħmlu Bil Ġeni u Cloning
Fil-klonazzjoni molekulari, il-vettur huwa molekula tad-DNA li jservi bħala t-trasportatur għat-trasferiment jew l-inseriment ta 'ġeni (i) barranin f'ċellula oħra, fejn jista' jiġi replikat u / jew espress. Il-vectors huma fost l -għodda essenzjali għall-klonazzjoni tal-ġeni u huma l-aktar utli jekk jikkodifikaw ukoll xi tip ta 'ġene markatur li jikkodifika molekula bijoeklatorika li tista' titkejjel fi stima bijoloġika biex tiżgura l-inserzjoni u l-espressjoni tagħhom fl-organiżmu ospitanti.
Speċifikament, vector ta 'klonazzjoni huwa DNA meħud minn virus, plasmid jew ċelloli (ta' organiżmi ogħla) li għandhom jiddaħħlu ma 'framment ta' DNA barrani għal skopijiet ta 'klonazzjoni. Peress li l-vettur tal-klonazzjoni jista 'jinżamm b'mod stabbli f'organiżmu, il-vettur fih ukoll karatteristiċi li jippermettu l-inserzjoni jew it-tneħħija tad-DNA b'mod konvenjenti. Wara li jiġi kklownjat ġo vettur tal-klonazzjoni, il-framment tad-DNA jista 'jiġi subklonijat aktar fi vettur ieħor li jista' jintuża b'iktar speċifiċità.
F'xi każijiet, il-viruses jintużaw biex jinfettaw il-batterja. Dawn il-viruses jissejħu batterjokiferi, jew fage, għal qosra. Retroviruses huma vectors eċċellenti għall-introduzzjoni tal-ġeni fiċ-ċelloli tal-annimali. Il-plażmidi, li huma biċċiet ċirkulari tad-DNA, huma l-aktar vettori użati b'mod komuni użati biex jintroduċu DNA barrani f'ċelluli batteriċi. Ħafna drabi jġorru ġeni ta 'reżistenza għall-antibijotiċi li jistgħu jintużaw għat-test għall-espressjoni tad-DNA tal-plasmid, fuq pjanċi petri antibijotiċi.
It-trasferiment tal-ġene f'ċelloli tal-pjanti huwa normalment imwettaq bl-użu tal-batterja tal-ħamrija Agrobacterium tumefaciens , li taġixxi bħala vettur u ddaħħal plasmid kbir fiċ-ċellula ospitanti. Dawk iċ-ċelloli li fihom il-vettur tal-klonazzjoni biss jikbru meta jkun hemm l-antibijotiċi.
Tipi Maġġuri ta 'Vetturi tal-Klonazzjoni
Is-sitt tipi ewlenin ta 'vettori huma:
- Plasmid. DNA strachromosomal ċirkulari li replika b'mod awtonomu ġewwa ċ-ċellula batterika. Il-plażmidi ġeneralment għandhom numru ta 'kopja għolja, bħal pUC19 li għandu numru ta' kopja ta '500-700 kopja għal kull ċellola.
- Phage. Molekuli lineari tad-DNA derivati minn bacteriophage lambda. Jista 'jiġi sostitwit minn DNA barrani mingħajr tfixkil taċ-ċiklu tal-ħajja tiegħu.
- Kosmidi. Molekula oħra ċirkolari tal-estrakkosomija tad-DNA li tgħaqqad il-karatteristiċi tal-plasmidi u l-fages.
- Kromosomi Artifiċjali Batterjali. Ibbażat fuq plażmidi batteriċi mini-F.
- Ħmira tal-Kromosomi Artifiċjali. Dan huwa kromożomi artifiċjali li fih telomeri (buffers li jintremew wara t-tmiem tal-kromosomi li jinqatgħu matul id-diviżjoni taċ-ċelluli) b'oriġini ta 'replikazzjoni, ċentromere tal-ħmira (parti minn kromosoma li tgħaqqad kromatidi oħmi jew diad), u markatur li jista' jintgħażel għall-identifikazzjoni fiċ-ċelloli tal-ħmira.
Kromosoma artifiċjali tal-bniedem. Dan it-tip ta 'vettur huwa potenzjalment utli għat-tqassim tal-ġeni fiċ-ċelloli umani, u għodda għal studji ta 'espressjoni u d-determinazzjoni tal-funzjoni tal-kromożomi uman. Jista 'jġorr framment tad-DNA kbir ħafna.
Il-vettori kollha ta 'l-inġinerija għandhom oriġini ta' replikazzjoni (replikatur), sit ta 'klonazzjoni (fejn l-inserzjoni ta' DNA barrani ma tfixkilx ir-replikazzjoni jew inattivazzjoni ta 'markers essenzjali), u markatur li jista' jintgħażel (tipikament ġene li jipprovdi reżistenza għal antibijotiku).