Żviluppat fl-1983, il-proċess tal-PCR għamilha possibbli li ssir is -sekwenzar tad-DNA u identifika l-ordni tan-nukleotidi fil-ġeni individwali.
Il-metodu juża ċ-ċiklar termali jew it-tisħin u t-tkessiħ ripetut tar-reazzjoni għat-tidwib u r-replikazzjoni tad-DNA. Hekk kif il-PCR tkompli, id-DNA "ġdid" jintuża bħala template għar-replikazzjoni u sseħħ reazzjoni katina, li twessa 'b'mod esponenzjali l-mudell tad-DNA.
It-tekniki tal-PCR huma applikati f'ħafna oqsma tal-bijoteknoloġija inklużi l -inġinerija tal-proteina , klonazzjoni, forensika (fingerprinting tad-DNA), ittestjar tal-paternità, dijanjosi ta 'mard ereditarju u / jew infettiv, u għall-analiżi ta' kampjuni ambjentali.
Fil-forensiċi, b'mod partikolari, il-PCR hija speċjalment utli għaliex tkabbar anki l-iżgħar ammont ta 'evidenza tad-DNA. Il-PCR jista 'jintuża wkoll biex janalizza d-DNA ta' eluf ta 'snin, u dawn it-tekniki ntużaw biex jidentifikaw kollox minn Mammoth ta' 800,000 sena għal mummies minn madwar id-dinja.
Il-proċedura tal-PCR hija kif ġej:
- Inizzjonalizzazzjoni: Dan il-pass huwa neċessarju biss għal polimerasi tad-DNA li jeħtieġu PCR bi startjar bis-sħana. Ir-reazzjoni tissaħħan għal bejn 94 u 96 ° C u tinżamm għal 1-9 minuti.
- Denaturazzjoni: Jekk il-proċedura ma teħtieġx inizjalizzazzjoni, id-denaturazzjoni hija l-ewwel pass. Ir-reazzjoni hija msaħħna għal 94-98 ° C għal 20-30 sekonda. Il-bonds ta 'l-idroġenu tal-mudell tad-DNA huma mfixkla u jinħolqu molekoli tad-DNA ta' ċomb wieħed.
- Ittestjar: It-temperatura tar-reazzjoni hija inqas għal bejn 50 u 65 ° C u miżmuma għal 20-40 sekonda. Il-primers anneal għall-mudell tad-DNA ta 'stranded waħdu. It-temperatura hija estremament importanti matul dan il-pass. Jekk huwa sħun wisq, il-primer jista 'ma jorbotx. Jekk ikun kiesaħ wisq, il-primer jista 'jorbot b'mod imperfett. Bond tajjeb jiġi ffurmat meta s-sekwenza tal-bidu tkun taqbel mill-qrib mas-sekwenza tal-mudell.
- Estensjoni / Elongazzjoni: It-temperatura matul dan il-pass tvarja skond it-tip ta 'polimerażi. Id-DNA polymerase sintetizza strand tad-DNA kompletament ġdid.
- Elongazzjoni finali: Dan il-pass jitwettaq f'70-74 ° C għal 5-15-il minuta wara ċ-ċiklu finali tal-PCR.
- Stennija finali: Dan il-pass mhuwiex obbligatorju. It-temperatura tinżamm f'4-15 ° C u tħawwad ir-reazzjoni.
Il-proċedura hija maqsuma fi tliet stadji:
- L-amplifikazzjoni esponenzjali: Matul kull ċiklu, il-prodott (il-biċċa speċifika tad-DNA li qed tiġi replikata) tiġi rduppjata.
- L-istadju ta 'twittija: Billi l-polimerija tad-DNA titlef l-attività u tikkonsma reaġenti, ir-reazzjoni titnaqqas.
- Plateau: L- ebda prodott ma jakkumula aktar.