Kif jispikkaw dawn il-endonuceleases
Kemm taf dwar l-enzimi ta 'restrizzjoni? Jiksbu aħjar x'inhuma u għaliex huma importanti, b'din ir-reviżjoni.
Id-definizzjoni ta 'Enżimi ta' Restrizzjoni
Endonucleases ta 'restrizzjoni huma klassi ta' enżima li tnaqqas il-molekuli tad-DNA. Kull enzima tirrikonoxxi sekwenza unika ta 'nukleotidi fil-linja tad-DNA. Dawn is-sekwenzi huma ġeneralment ta 'bejn 4 u 6 pari bażi. Is-sekwenzi huma palindromiċi billi l-linja tad-DNA komplementari għandha l-istess sekwenza biss fid-direzzjoni inversa.
Fi kliem ieħor, iż-żewġ linji tad-DNA jinqatgħu fl-istess post.
Fejn Dawn l-Enżimi Jinstabu
Enżimi ta 'restrizzjoni jinstabu f'ħafna razez differenti ta' batterji fejn ir-rwol bijoloġiku tagħhom huwa li jipparteċipaw fid-difiża taċ-ċelluli. Dawn l-enzimi "jirrestrinġu" DNA barrani (eż. Virali) li jidħol fiċ-ċellola, billi jeqirduh. Iċ-ċellula ospitanti għandha sistema ta 'modifika ta' restrizzjoni li timla d-DNA tagħha f'siti speċifiċi għall-enzimi ta 'restrizzjoni rispettivi tagħha, u b'hekk tipproteġiha mill-qsim. Ġew skoperti aktar minn 800 enzima magħrufa li jirrikonoxxu aktar minn 100 sekwenza ta 'nukleotide differenti.
Użu fil-Bijoteknoloġija
L-enżimi ta 'restrizzjoni jintużaw fil-bijoteknoloġija biex jaqta' d-DNA f'firħiet iżgħar sabiex tistudja d-differenzi tat-tul tal-framment bejn individwi (Restriction Fragment Length Polymorphism - RFLP). Huma qed jintużaw ukoll għall-klonazzjoni tal-ġeni.
It-tekniki RFLP intużaw biex jiddeterminaw li individwi jew gruppi ta 'individwi għandhom differenzi distintivi fis-sekwenzi tal-ġeni u mudelli ta' qsim ta 'restrizzjoni f'ċerti oqsma tal-ġenoma.
L-għarfien ta 'dawn iż-żoni uniċi huwa l-bażi għall -marki tas-swaba tad-DNA . Kull wieħed minn dawn il-metodi jiddependi fuq l-użu ta ' elettroforeżi tal -ġell ta' agarose għas-separazzjoni tal-frammenti tad-DNA. Il-buffer TBE, li huwa magħmul minn bażi Tris, aċidu boriku, u EDTA, huwa komunement użat għall-elettroforeżi bil-ġell ta 'agarose biex jeżamina prodotti tad-DNA.
Tipi ta 'Enżimi ta' Restrizzjoni
Hemm tliet tipi differenti ta 'enzimi ta' restrizzjoni. It-Tip I inaqqas id-DNA f'postijiet bl-addoċċ sa 1000 jew aktar pari ta 'bażi mis-sit ta' rikonoxximent. Tip III inaqqas madwar 25 pari ta 'bażi mis-sit. It-tipi I u III jeħtieġu ATP u jistgħu jkunu enżimi kbar b'sotto-unitajiet multipli. L-enżimi tat-Tip II, li jintużaw b'mod predominanti fil-bijoteknoloġija, jaqtaw id-DNA fi ħdan is-sekwenza rikonoxxuta mingħajr il-ħtieġa ta 'ATP u huma iżgħar u aktar sempliċi.
L-enżimi ta 'restrizzjoni tat-Tip II jissejħu skond l-ispeċi batteriċi li minnhom huma iżolati. Pereżempju, l-enzima EcoRI kienet iżolata minn E. coli . Ħafna mill-pubbliku huwa familjari mat-tifqigħat ta ' E. coli fl-ikel.
L-enżimi ta 'restrizzjoni tat-Tip II jistgħu jiġġeneraw żewġ tipi differenti ta' qtugħ skont jekk jaqtax iż-żewġ fergħat fiċ-ċentru tas-sekwenza ta 'rikonoxximent jew kull strixxa eqreb lejn tarf wieħed tas-sekwenza ta' rikonoxximent.
L-ewwel qatgħa se tiġġenera "trufijiet mingħajr ponta" mingħajr l-ebda overhangs tan-nukleotide. Dan ta 'l-aħħar jiġġenera truf "twaħħal" jew "koeżiv" minħabba li kull framment tad-DNA li jirriżulta għandu sporġenza li tikkumplimenta l-frammenti l-oħra. Iż-żewġ huma utli fil-ġenetika molekulari biex isiru DNA u proteini rikombinanti .
Din il-forma ta 'DNA tispikka għaliex hija prodotta mil-ligazzjoni (twaħħil flimkien) ta' żewġ linji differenti jew aktar li ma kinux oriġinarjament marbuta flimkien.