Kif tagħmel dan il-buffer ta 'tbajja immunohistokimiku
Is-salina buffered bil-fosfat (PBS) hija soluzzjoni buffer li tintuża komunement għal tbajja immunohistokimika (IHC) u ħafna drabi tintuża fir-riċerka bijoloġika. PBS hija soluzzjoni tal-melħ ibbażata fuq l-ilma li fiha l-idroġenu fosfat tas-sodju, il-klorur tas-sodju u, f'xi każijiet, il-klorur tal-potassju u l-fosfat tad-diidroġenu tal-potassju.
Tbajja Immunohistokimika
Immunohistochemistry tirreferi għall-proċess ta 'l-iskoperta ta' antiġeni bħal proteini fiċ-ċelloli ta 'taqsima tat-tessut billi jintuża l-prinċipju ta' antikorpi li jwaħħal speċifikament ma 'l-antiġeni fit-tessuti bijoloġiċi.
It-tebgħa immunofluworixxenti kienet l-ewwel metodu ta 'tbajja immunohisto-kemikali.
L-antiġeni jsiru viżibbli meta jiġu konjugati ma 'antikorpi li jużaw żebgħat fluworexxenti minħabba reazzjoni li twaħħal ta' antiġenu-antikorp Dan il-proċess iseħħ meta jiġi attivat b'dawl eċċitanti ta 'tul ta' mewġ speċifiku taħt mikroskopju fluworexxenti.
Il-konċentrazzjonijiet ta 'osmolarità u joni tas-soluzzjonijiet jaqblu ma' dawk tal-ġisem tal-bniedem - huma isotoniċi.
A Ricetta għall-PBS
Tista 'tipprepara PBS b'diversi modi. Hemm formoli multipli. Xi wħud minnhom ma fihomx potassju, filwaqt li oħrajn fihom kalċju jew manjeżju .
Din ir-riċetta hija relattivament faċli. Huwa għall-10X PBS soluzzjoni stock (0.1M). Madankollu, tista 'wkoll tagħmel soluzzjoni stock ta' 1X, jew tibda b'din ir-riċetta 10X u ħallatha għal 1X.
Il-proċess kollu jieħu madwar 10 minuti.
Għandha tingħata wkoll għażla biex iżżid Tween.
Dak li għandek bżonn tagħmel PBS Buffer
- Fosfat tas-sodju monobasiku (anidru)
- Sodium phosphate dibasic (anidru)
- Sodium chloride
- Skala u użaw dgħajjes
- Stirrer manjetiku u ħawwad bar
- Soluzzjoni ta 'pH li hija kkalibrata u soluzzjonijiet xierqa għall-aġġustament tal-pH
- Flixkun volumetriku 1L
- Tween 20 (mhux obbligatorju)
Kif tagħmel fosfat buffered saline (PBS)
Iżen 10.9 g ta 'fosfat tas-sodju anidridu dibasic (Na2HPO4), 3.2g fosfat tas-sodju anidru monobasiku (NaH2PO4), u 90g sodium chloride (NaCl).
Dewweb fi ftit ilma distillat ta '1L.
Aġġusta l-pH għal 7.4 u għamel is-soluzzjoni sa volum finali ta '1L.
Dewweb 10X qabel l-użu u aġġusta mill-ġdid il-pH jekk meħtieġ.
Tista 'tagħmel soluzzjoni PBS li jkun fiha 0.5 fil-mija Tween 20 billi żżid 5mL Tween 20 mas-soluzzjoni 1L.
Għajnuniet biex Nagħmlu PBS Buffer
Aħżen il-buffer fit-temperatura tal-kamra wara li tkun għamilt is-soluzzjoni tal-PBS.
Ir-reaġenti mhux anidriċi jistgħu jiġu sostitwiti imma għandek terġa 'tikkalkula l-massa xierqa ta' kull waħda biex takkomoda l-molekuli ta 'l-ilma miżjuda.
Użi ta 'fosfat buffered saline (PBS)
Is-saline buffered bil-fosfat għandu bosta użi minħabba li huwa isotoniku u mhux tossiku għal ħafna ċelloli. Jista 'jintuża biex jiddilwixxi s-sustanzi u ħafna drabi jintuża biex jitlaħlaħ il-kontenituri taċ-ċelloli. Il-PBS jista 'jintuża bħala dilwent f'diversi metodi biex jinxef il-bijomolekuli minħabba li l-molekuli ta' l-ilma fih se jkunu strutturati madwar is-sustanza-proteina, pereżempju. Se jkun "imnixxef" u immobilizzat f'wiċċ solidu.
Il-pH jibqa 'stabbli u konsistenti biex jipprevjeni l-qerda taċ-ċelloli.
Il-film irqiq ta 'l-ilma li jingħaqad mas-sustanza jipprevjeni d-denaturazzjoni jew bidliet oħra ta' konformazzjoni. Il-buffers tal-karbonat jistgħu jintużaw għall-istess skop iżda b'inqas effikaċja.
Il-PBS jista 'jintuża wkoll biex jieħu spettru ta' referenza meta tkejjel l - adsorbiment tal- proteina f'elipsometrija.