Dan il-buffer jintuża għal separazzjoni ta 'electrophoresis tad-DNA
Il-buffer TBE huwa partikolarment utli għas-separazzjoni ta 'frammenti iżgħar tad-DNA (MW <1000), bħal prodotti żgħar ta' diġestjonijiet ta ' enzimi ta' restrizzjoni .
TBE għandu kapaċità akbar ta 'buffering u se jagħti riżoluzzjoni aktar qawwija mill- buffer TAE . Il-buffer TAE huwa soluzzjoni magħmula minn bażi Tris, aċidu aċetiku u EDTA (Tris-acetate-EDTA).
TBE ġeneralment jiswa aktar mill-TAE u jinibixxi l-ligase tad-DNA, li jista 'jikkawża problemi jekk il-passi sussegwenti ta' purifikazzjoni tad-DNA u ta 'ligazzjoni huma intenzjonati. Bit-tliet passi sempliċi li jsegwu, jitgħallmu kif jagħmlu buffer TBE. M'għandux jieħu aktar minn madwar 30 minuta biex joħloq dan il-buffer. Ara kif:
Ipprepara Ħażna Soluzzjoni ta 'EDTA
Għandha titħejja soluzzjoni ta 'EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) qabel iż-żmien. EDTA ma jmurx kompletament f'soluzzjoni sakemm il-pH jiġi aġġustat għal madwar 8.0. Għal soluzzjoni stokk ta '500 millilitru ta' 0,5 M EDTA, iżen 93.05 grammi ta 'melħ tad-disodju EDTA (FW = 372.2). Imbagħad dewweb f'400 millilitri ilma dejonizzat u aġġusta l-pH ma 'NaOH. Wara dan, aqla 's-soluzzjoni għal volum finali ta' 500 millilitri.
Ipprepara Soluzzjoni tal-Istokk ta 'TBE
Agħmel soluzzjoni ta 'stokk konċentrat (5x) ta' TBE billi tiżen 54 g bażi Tris (FW = 121.14) u 27.5 g aċidu boriku (FW = 61.83) u ħoll kemm f'madwar 900 millilitru ta 'ilma deonizzat. Imbagħad żid 20 millilitri ta '0,5 M EDTA (pH 8.0) u aġġusta s-soluzzjoni għal volum finali ta' 1 litru.
Din is-soluzzjoni tista 'tinħażen f'temperatura tal-kamra iżda preċipitat se jifforma f'soluzzjonijiet antiki. Aħżen il-buffer fil-fliexken tal-ħġieġ u armih jekk ikun ġie ffurmat il-preċipitat.
Ipprepara Soluzzjoni tax-Xogħol ta 'TBE
Għal electrophoresis fil-ġell ta 'agarose, buffer TBE jista' jintuża f'konċentrazzjoni ta '0.5x (1:10 dilwizzjoni ta' l-istokk konċentrat). Iddilwixxi s-soluzzjoni tal-ħażna b'10x f'ilma dejonizzat. Il-konċentrazzjonijiet finali tas-solut huma 45 mM Tris-borat u 1 mM EDTA. Il-buffer issa huwa lest għall-użu fit- tħaddim ta 'ġel ta' agarose .
Dak li għandek bżonn
Biex tagħmel buffer TBE, ikollok bzonn biss erba 'sustanzi. Il-punti l-oħra f'din il-lista huma tagħmir. L-erba 'sustanzi meħtieġa huma l-melħ tad-disodju EDTA, il-bażi Tris, l-aċidu boriku u l-ilma dejonizzat.
Fir-rigward tat-tagħmir, għandek bżonn ta 'meter tal-pH u standards ta' kalibrazzjoni, kif xieraq. Minbarra dan, ser ikollok bżonn 600-millilitru u 1500-milliliter beakers jew fliexken. L-arrotondament tal-ħtiġijiet tat-tagħmir tiegħek huma ċilindri gradwati u ħawwad il-vireg u ħawwad il-pjanċi.
Iċċekkja l-inventarju fil-laboratorju li tkun qed tuża biex taċċerta ruħek li għandek dak kollu li għandek bżonn qabel ma tibda. Xejn huwa agħar milli jkollok tieqaf f'nofs it-tħejjija ta 'soluzzjoni għax inti spiċċajt mill-materjali xierqa.
Jekk il-laboratorju tiegħek qiegħed fl-iskola jew fis-sit tax-xogħol tiegħek, iċċekkja mal-persunal xieraq biex tara li għandhom l-oġġetti kollha fl-istokk. Jekk tagħmel hekk tista 'tiffranka ħin u enerġija fl-aħħar.