Dan l-Istandard Jintuża biex Studju Moviment tad-DNA
Dan il-buffer għandu qawwa jonika baxxa u kapaċità ta 'buffering baxxa. Huwa l-iktar adattat għall-elettroforesi ta 'biċċiet tad-DNA kbar (> 20 kb) u jeħtieġ li jiġu mibdula ta' spiss jew riċirkulati għal ħinijiet itwal (> 4 h).
B'dan f'moħħna, tista 'tkun trid tikkunsidra diversi lottijiet tal-buffer.
Minħabba li l-buffer huwa faċli biex isir u l-passi jistgħu jitwettqu malajr, li jagħmlu aktar minn lott wieħed kull darba m'għandux ikun partikolarment ħin jew diffiċli biex jinġibed. Uża l-istruzzjonijiet ta 'hawn taħt, għandha tieħu biss 30 minuta biex tagħmel il-buffer TAE. Ara kif:
Ipprepara Ħażna Soluzzjoni ta 'EDTA
Soluzzjoni ta 'EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) hija ppreparata qabel iż-żmien. EDTA mhux ser imur kompletament f'soluzzjoni sakemm il-pH jiġi aġġustat għal madwar 8.0. Għal soluzzjoni stokk ta '500 millilitru ta' 0,5 M EDTA, iżen 93.05 grammi ta 'melħ tad-disodju EDTA (FW = 372.2). Dewweb f'440 millilitri ilma dejonizzat u aġġusta l-pH ma 'idrossidu tas-sodju (NaOH). Żomm is-soluzzjoni għal volum finali ta '500 millilitru.
Whip Up a Stock Solution ta 'TAE
Agħmel soluzzjoni ta 'stokk konċentrat (50x) ta' TAE billi tiżen 242 gramma ta 'bażi Tris (FW = 121.14) u ħollha f'madwar 750 millilitru ilma deonizzata.
Żid b'attenzjoni 57.1 millilitri ta 'aċidu glaċjali u 100 millilitri ta' 0,5 M EDTA (pH 8.0). Wara dan, aġġusta s-soluzzjoni għal volum finali ta 'litru. Din is-soluzzjoni tal-ħażna tista 'tinħażen f'temperatura ambjentali. Il-pH ta 'dan il-buffer mhux aġġustat u għandu jkun ta' madwar 8.5.
Ipprepara Soluzzjoni tax-Xogħol tat-TAE
Is-soluzzjoni tax-xogħol ta 'buffer TAE 1x issir sempliċement billi ddewweb is-soluzzjoni tal-ħażna b'50x f'ilma dejonizzat.
Il-konċentrazzjonijiet finali tas-soltu huma 40 mM. Tris-acetate u 1 mM EDTA. Il-buffer issa huwa lest għall-użu fit-tħaddim ta 'ġel ta' agarose.
Dak li għandek bżonn għall-Ħażna ta 'Riserva
Peress li l-buffer TAE jeħtieġ biss sett ta 'struzzjonijiet mgħaġġel u sempliċi, in-numru ta' materjali meħtieġa għalih mhuwiex eċċessiv. Int ser ikollok bżonn biss melħ tad-disodju EDTA, bażi Tris, u aċidu aċetiku glaċjali.
Li tagħmel il-buffer teħtieġ ukoll arloġġ tal-pH u standards tal-kalibrazzjoni, kif xieraq. Int ser ikollok bżonn ukoll 600 millilitru u 1500 millilitru beakers jew fliexken kif ukoll ċilindri gradwati. Finalment, ikollok bzonn ilma dejonizzat, ħawwad il-vireg, u ħawwad il-pjanċi.
Tgeżwir Up
Fejn qed tippjana li tagħmel il-buffer - f'sit ta 'l-iskola, f'post tax-xogħol, jew f'post ieħor, bħad-dar tiegħek? Iċċekkja l-inventarju qabel ma tibda tiżgura ruħek li għandek il-materjali kollha ta 'hawn fuq għall-buffer TAE.
Jekk tippreferi li m'għandekx tħallas għall-materjali, tagħżel li tagħmel il-buffer barra d-dar tiegħek huwa rakkomandat. Tista 'faċilment tordna l-materjal li għandek bżonn fuq l-internet jew żur maħżen ta' speċjalità għalihom.